我公司為感謝朋友們長期以來的支持與厚愛，特選在雙十一前為咱們*共享：elisa試劑盒試驗的閱歷。以下是我公司技術人員總結出的小閱歷供咱們參考：

    包被原的性質很重要

    這關系到做出的抗體可不能夠被其識別，所以保存抗原很重要，做重組蛋白時，要在冰浴下緩慢融化。還有有的包被原或許不是蛋白，關于生物素和脂類物質或小分子物質我們要事先對其改造再加以包被。

    1、親和素生物素：先親和素先包被載體，參加生物素化的DNA，這種包被方法均勻、健壯，已擴大應用于各種抗原物質的定量測定。

    2、脂類物質：可將其在有機溶劑中溶解后參加ELISA板孔中，開蓋置冰箱過夜或涼風吹干，待酒精蒸騰后，讓脂質天然干固在固相表面。

    3、小分子必須依靠和大的蛋白載體偶聯(lián)后才能固定在固相載體上。

    包被液的挑選

    一般挑選ph9.6的碳酸鹽緩沖液。但有時由于試驗的需求，包被原的特殊性也或許采用中性的緩沖溶液來包。應留意：

    由于蛋白質與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結合的，ELISA試劑盒靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用，這種物理吸附對錯特異性的，受蛋白質的分子量、等電點、濃度等的影響，大分子蛋白質較小分子蛋白質通常含有更多的疏水基團，故更易吸附到固相載體表面。具體的試驗還要有穩(wěn)固的理論外也要實踐，看一下zui終可不能夠應用到自己試驗當中去。常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩沖液，還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。

    封閉

    繼包被之后用高濃度的無關蛋白質溶液再包被的進程。封閉便是讓許多不相關的蛋白質充填這些空隙，然后架空ELISA后的過程中煩擾物質的再吸附。
常用封閉劑有：0.05%-0.5%的BSA；10%的小牛血清或1%明膠；脫脂奶粉，比較價廉，能夠高濃度使用（5%－10％）；ELISA試劑盒還有一些稀有用到的各種動物血清和酪蛋白等等。但zui終選用什么，要依據試驗具體來實踐。

    洗刷板

    能夠說在ELISA操作中，洗刷是zui首要的關鍵技術。由于聚苯乙烯等塑料對蛋白質的吸附是普遍性的，為到達別離游離的和結合的酶標記物的意圖，鏟除殘留在板孔中游離的物質，以及非特異性地吸附的煩擾物質，在洗刷時又應把這種非特異性吸附的煩擾物質洗刷下來。所以在洗板時會有必定差錯，人為因素很大（當然有條件的用洗板機在外），洗的不完全或串了孔，對如此活絡的ELISA系統(tǒng)但是不小的影響。

    加抗體標本(和二抗)

    留意該換槍頭時換槍頭。標本稀釋一般可用pbs稀釋，也可用封閉液去稀釋。如需加二抗，還要留意二抗的作業(yè)濃度，太高糟ta，太低則著色淺。

    顯色

    我們一開始做的時分，要挑選適合的顯色系統(tǒng)。留意顯色系統(tǒng)酶活性底物的保存HRP結合物加硫柳泵，AP結合物可加疊氮鈉。每次做盡量要把陰陽空三個對照做好，如出現問題也好剖析。

原創(chuàng)作者：上海恒遠生物科技有限公司